微生物限度檢測原理和應用范圍

微生物的檢測，無(wú)論在理論研究還是在生產(chǎn)實(shí)踐中都具有重要的意義，本文對生長(cháng)量測定法、微生物計數法、生理指標法和商業(yè)化快速微生物檢測簡(jiǎn)要介紹了利用微生物重量，體積，大小，生理代謝物等指標的二十余種常用的檢測方法，簡(jiǎn)要介紹了這些方法的原理，應用范圍和優(yōu)缺點(diǎn)。
　　一個(gè)微生物細胞在合適的外界條件下，不斷的吸收營(yíng)養物質(zhì)，并按自己的代謝方式進(jìn)行新陳代謝。如果同化作用的速度超過(guò)了異化作用，則其原生質(zhì)的總量（重量，體積，大?。┚筒粩嘣黾?，于是出現了個(gè)體的生長(cháng)現象。如果這是一種平衡生長(cháng)，即各細胞組分是按恰當的比例增長(cháng)時(shí)，則達到程度后就會(huì )發(fā)生繁殖，從而引起個(gè)體數目的增加，這時(shí)，原有的個(gè)體已經(jīng)發(fā)展成一個(gè)群體。隨著(zhù)群體中各個(gè)個(gè)體的進(jìn)一步生長(cháng)，就引起了這一群體的生長(cháng)，這可從其體積、重量、密度或濃度作指標來(lái)衡量。微生物的生長(cháng)不同于其他生物的生長(cháng)，微生物的個(gè)體生長(cháng)在科研上有困難，通常情況下也沒(méi)有實(shí)際意義。微生物是以量取勝的，因此，微生物的生長(cháng)通常指群體的擴增。微生物的生長(cháng)繁殖是其在內外各種環(huán)境因素相互作用下的綜合反映。因此生長(cháng)繁殖情況就可作為研究各種生理生化和遺傳等問(wèn)題的重要指標，同時(shí)，微生物在生產(chǎn)實(shí)踐上的各種應用或是對致病，霉腐微生物的防治都和他們的生長(cháng)抑制緊密相關(guān)。所以有必要介紹一下微生物生長(cháng)情況的檢測方法。既然生長(cháng)意味著(zhù)原生質(zhì)含量的增加，所以測定的方法也都直接或間接的以次為根據，而測定繁殖則都要建立在計數這一基礎上。微生物生長(cháng)的衡量，可以從其重量，體積，密度，濃度，做指標來(lái)進(jìn)行衡量。
　　1. 微生物計量法
　　1.1 體積測量法
　　又稱(chēng)測菌絲濃度法，通過(guò)測定體積培養液中所含菌絲的量來(lái)反映微生物的生長(cháng)狀況。方法是，取量的待測培養液（如10 mL）放在有刻度的離心管中，設定的離心時(shí)間（如5 min）和轉速（如5000 rpm），離心后，倒出上清夜，測出上清夜體積為v，則菌絲濃度為（10-v）/10。菌絲濃度測定法是大規模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)上微生物生長(cháng)的一個(gè)重要監測指標。這種方法比較粗放，簡(jiǎn)便，快速，但需要設定一致的處理條件，否則偏差很大，由于離心沉淀物中夾雜有一些固體營(yíng)養物，結果會(huì )有偏差。
　　稱(chēng)干重法
　　可用離心或過(guò)濾法測定。一般干重為濕重的10~20%。在離心法中，將體積待測培養液倒入離心管中，設定的離心時(shí)間和轉速，進(jìn)行離心，并用清水離心洗滌1~5次，進(jìn)行干燥。干燥可用烘箱在105 ℃或100 ℃下烘干，或采用紅外線(xiàn)烘干，也可在80 ℃或40 ℃下真空干燥，干燥后稱(chēng)重。如用過(guò)濾法，絲狀真菌可用濾紙過(guò)濾，細菌可用醋酸纖維膜等濾膜過(guò)濾，過(guò)濾后用少量水洗滌，在40 ℃下進(jìn)行真空干燥。稱(chēng)干重發(fā)法較為煩瑣，通常獲取的微生物產(chǎn)品為菌體時(shí)，常采用這種方法，如活性干酵母（Activity Dry Yeast, ADY）,一些以微生物菌體為活性物質(zhì)的飼料和肥料。
　　1.3 比濁法
　　微生物的生長(cháng)引起培養物混濁度的增高。通過(guò)紫外分光光度計測定波長(cháng)下的吸光值，判斷微生物的生長(cháng)狀況。對某一培養物內的菌體生長(cháng)作定時(shí)跟蹤時(shí)，可采用一種特制的有側臂的三角燒瓶。將側臂插入光電比色計的比色座孔中，即可隨時(shí)測定其生長(cháng)情況，而不必取菌液。該法主要用于發(fā)酵工業(yè)菌體生長(cháng)監測。如使用UNICO公司的紫外-可見(jiàn)分光光度計，在波長(cháng)600 nm處用比色管定時(shí)測定發(fā)酵液的吸光光度值OD600，以此監控E.coli的生長(cháng)及誘導時(shí)間。
　　1.4 菌絲長(cháng)度測量法
　　對于絲狀真菌和一些放線(xiàn)菌，可以在培養基上測定時(shí)間內菌絲生長(cháng)的長(cháng)度，或是利用一只一端開(kāi)口并帶有刻度的細玻璃管，到入合適的培養基，臥放，在開(kāi)口的一端接種微生物，一段時(shí)間后記錄其菌絲生長(cháng)長(cháng)度，借此衡量絲狀微生物的生長(cháng)。