厭氧培養箱實(shí)驗操作流程

操作室厭氧環(huán)境形成：
1. 按使用要求放置好必要的附件和器具;
2. 通電源開(kāi)照明燈，開(kāi)溫控儀，調節所需溫度;
3. 操作室內放入1000g鈀粒（封閉）和500g干燥劑，并放入美蘭指示紙（封閉）;
4. 關(guān)緊取樣室內外門(mén)，并抽真空校驗;
5. 操作室內初次置換（氮氣置換）：
A. 把乳膠手套套在觀(guān)察板法蘭圈上并扎緊
B. 接通氮氣進(jìn)氣路，打開(kāi)氮氣控制閥1，使手套鼓起，關(guān)閉閥門(mén)1，然后扎緊袋口;
6. 操作室D二次置換（氮氣置換）重復一次充氮過(guò)程，取樣室先抽真空，并注意隨時(shí)用腳踏開(kāi)關(guān)開(kāi)閉排氣。如此連續三次氮氣置換。
7. 操作室D四次置換（混合氣體置換）：
（混合氣體配比為N2 85%、H2 10%、CO2 5%）
A. 調換氣路打開(kāi)混合氣閥3進(jìn)氣，充氣時(shí)取樣室先抽真空，并隨時(shí)用腳踏開(kāi)關(guān)開(kāi)閉排氣;
B. 關(guān)掉混合氣體閥3，并打開(kāi)閥5，使混合氣體經(jīng)過(guò)流量計，調整流量計，流量為每分鐘10ml左右;
C. 混合氣體重復2-3次轉換，經(jīng)過(guò)上述過(guò)程，基本形成厭氧環(huán)境。
8. 操作室內打開(kāi)粑粒除氧劑，接通除氧催化器電源進(jìn)行催化除氧，一小時(shí)后打開(kāi)美蘭指示紙觀(guān)察其變色狀況，不變色為操作室內達到厭氧環(huán)境;
9. 開(kāi)紫外線(xiàn)滅菌燈，室內進(jìn)行滅菌處理，滅菌時(shí)間按具體實(shí)驗自定。
菌種的置入和培養：
1. 檢查取樣室內門(mén)并關(guān)緊;
2. 打開(kāi)取樣室外門(mén)，將菌種放入取樣室后即關(guān)上外門(mén);
3. 取樣室充氮置換三次過(guò)程：打開(kāi)真空泵，先抽真空度500ml汞柱（66kPa）以上停，然后人工打開(kāi)氮氣閥2進(jìn)氣，使指針回復零位，關(guān)掉閥2。D二次重復操作一次。D三次操作時(shí)，使真空度500ml汞柱（66kPa）以上停，然后打開(kāi)閥4進(jìn)混合氣，使指針回復零位，關(guān)掉閥4。取樣室充氮置換三次過(guò)程結束;
4. 如選定真空度較低就需要增加置換的次數;
5. 取樣室外門(mén)開(kāi)啟、關(guān)緊，再抽低真空度100ml汞柱（13kPa）檢驗;
6. 厭氧培養箱需要長(cháng)期連續使用的條件：
A. 每天在操作室內打開(kāi)美蘭指示紙觀(guān)察，如不正常就重新?lián)Q氣;
B. 要長(cháng)期連續輸入微量的混合氣體，使補進(jìn)的氮氣能和微量的氧結合通過(guò)催化吸收，保證室內厭氧狀態(tài)，補入混合氣流量選定為每分鐘10ml左右;
C. 連續培養運行一天，更換一次除氧劑和干燥劑。
D. 操作室內溫度可任意選擇和控制。
7. 混合氣瓶、氮氣瓶輸出壓力調整：調節減壓閥，使輸出壓力0.1Mpa左右。